การวัดความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของ DNA&RNA โดยใช้ UV-Vis

การวัดความเข้มข้นและความบริสุทธิ์ของ DNA&RNA โดยใช้ UV-Vis

วัสดุที่จำเป็น

1. ตัวอย่างดีเอ็นเอ
2. บัฟเฟอร์ TE หรือน้ำปราศจากนิวคลีเอส (เพื่อเจือจางหากจำเป็น)
3. สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis
4. คิวเวตต์ควอตซ์ (โดยทั่วไปจะมีความยาวทางเดิน 1 ซม.)
5. ปิเปตและทิป
6. ถุงมือและเสื้อกาวน์แล็บ (เพื่อความปลอดภัยและการป้องกันการปนเปื้อน)

มาตรการ

1. **การเตรียมตัวอย่าง DNA:**
- หากตัวอย่าง DNA ของคุณมีความเข้มข้น ให้เจือจางด้วยบัฟเฟอร์ TE หรือน้ำที่ไม่มีนิวคลีเอสเพื่อให้ได้ความเข้มข้นที่เหมาะสม โดยปกติแล้ว จะใช้ปัจจัยเจือจางที่ 1:50 หรือ 1:100
- ผสมตัวอย่างให้ละเอียดโดยการปิเปตขึ้นและลงหรือหมุนวนเบาๆ

2. **การเตรียมการเปล่า:**
- เติมคิวเวตต์ควอตซ์ด้วยบัฟเฟอร์ TE หรือน้ำที่ปราศจากนิวคลีเอส ซึ่งจะใช้ในการทำให้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์ว่างเปล่า
- ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีฟองอากาศในคิวเวตต์ และสะอาดด้านนอก

3. **การตั้งค่าสเปกโตรโฟโตมิเตอร์:**
- เปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์ UV-Vis และปล่อยให้อุ่นขึ้น (โดยทั่วไปประมาณ 15 นาที)
- ตั้งค่าความยาวคลื่นเป็น 260 นาโนเมตรสำหรับการตรวจวัด DNA นอกจากนี้ ให้ตั้งค่าความยาวคลื่นเป็น 280 นาโนเมตร และ 230 นาโนเมตร เพื่อการประเมินความบริสุทธิ์

4. **การปิดเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์:**
- วางคิวเวตต์เปล่าลงในเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์
- ปิดฝาแล้วกดปุ่ม "ว่าง" เพื่อให้เครื่องมือเป็นศูนย์ที่ 260 นาโนเมตร
- ทำซ้ำขั้นตอนนี้เป็นเวลา 280 นาโนเมตรและ 230 นาโนเมตร หากเครื่องมือของคุณต้องการแบลงค์แยกกันสำหรับแต่ละความยาวคลื่น

5. **การวัดตัวอย่าง DNA:**
- นำคิวเวตต์เปล่าออก และค่อยๆ ปิเปตตัวอย่าง DNA ลงในคิวเวตต์ควอตซ์ที่สะอาด ตรวจสอบให้แน่ใจว่าไม่มีฟองอากาศ
- เช็ดด้านนอกของคิวเวตต์ด้วยกระดาษทิชชู่ไร้ขนเพื่อขจัดรอยนิ้วมือหรือสิ่งตกค้าง
- วางคิวเวตลงในเครื่องสเปกโตรโฟโตมิเตอร์
- วัดการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตร, 280 นาโนเมตร และ 230 นาโนเมตร

6. **การบันทึกและการคำนวณความเข้มข้น:**
- บันทึกค่าการดูดกลืนแสง (A260, A280 และ A230)